一、细胞基本信息

【细胞名称】人胚肾细胞
【细胞别名】Hek293T; HEK-293T; HEK293T; HEK-293-T; HEK293T; 293-T; 293T; Human Embryonic Kidney 293T; 293tsA1609neo
【种属来源】人
【组织来源】肾脏
【细胞形态】上皮细胞样
【生长特性】贴壁生长
【培养体系】MEM + 10% FBS + 1% P/S
【传代比例】1:2至1:4，每2-3天更换培养液
【培养条件】气相：95%空气 + 5%二氧化碳，温度：37℃
【冻存条件】冻存液：60%基础培养基 + 30% FBS + 10% DMSO；存储条件：液氮
【安全性】建议在二级生物安全柜内操作，并做好个人防护。

二、复苏及传代方法

1. 细胞株的复苏（冻存管）

1. 将冻存管在37℃水浴中快速完全融化，并轻轻摇晃以促进融化，快速复苏能提高细胞活性。
2. 打开冻存管前，使用75%酒精擦拭其外壁。
3. 将完全融化的细胞离心，或转移至无菌的15ml离心管中，以400g离心5分钟，吸去上清，注意保留细胞沉淀。用新鲜的完全培养液重悬细胞后转移至培养器皿，混匀并置于CO2培养箱中37℃培养。
4. 第二天根据细胞贴壁或生长状态更换培养液。请注意，如果冻存管不能及时复苏，请将其放置在-80℃或液氮中暂存，并尽快进行复苏以便培养。

2. 细胞株的复苏（T25瓶）

1. 将T25瓶的外包装去除后，用75%酒精擦拭瓶外壁。
2. 置于倒置显微镜下观察细胞状态，确认无异常后，使用移液器移去多余的培养液，将瓶置于CO2培养箱中37℃继续培育过夜。
3. 第二天根据细胞的贴壁或生长状态考虑进行换液或传代，传代比例参考1:2至1:4。

三、注意事项

1. 每支冻存管约含1×10⁶个细胞，体积为1ml，预期存活率为60-90%。建议将复苏的细胞转移至一个T25瓶或一个6cm培养皿中。如果存活率较低，可以进行消化后转移至35cm培养皿或T125瓶中，促进细胞生长。
2. 如果该产品是常温运输且培养瓶中充满了完全培养液的贴壁细胞，收到后需：（1）及时拍照纪录是否有漏液或瓶身破损；（2）用75%酒精擦拭培养瓶表面并观察细胞状态；（3）切勿立即打开培养瓶盖，将细胞置于细胞培养箱内静置2-4小时以稳定细胞状态；（4）静置后，再取出进行镜检和拍照，记录细胞状态。
3. 当细胞密度超过85%时，请迅速进行传代操作；如果悬浮细胞较多，请将培养瓶静置过夜以使悬浮细胞再次贴壁。如果收到的是常温运输的离心管中的悬浮细胞，可以直接转移至培养皿或培养瓶中进行培养。若培养液颜色正常，则保留原培养液继续培养，同时在首次更换培养液时，保留一半原培养液并加入一半新鲜培养液，以确保细胞生长适应，维持良好的状态。
4. 所有细胞培养操作请在生物安全柜台中进行，严格遵守无菌操作原则。

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